小鼠脾脏淋巴细胞提取方法（使用MP LSM 0850494X)

实验准备：10ml注射器活塞、70um细胞筛网或尼龙网、50ml（或35mm培养皿）和15ml离心管、细胞计数板、移液管、加样枪、水平离心机（带g，能调为Break off, 能调温度）、无菌刀片、无菌剪刀和镊子、75%的乙醇、生理盐水、DMEM、PBS 或RPMI-1640液

实验步骤：

1.断颈处死小鼠，浸泡于75%的乙醇中，10min；

2.在超净台中取出小鼠脾脏（无菌操作）；

3.将70um细胞筛网置于50ml离心管，将分离脾脏置于筛网，用剪刀剪碎脾脏，用10ml注射器活塞研磨，边研磨边加入RPMI-1640冲洗，约10ml；

4.将5ml的RPMI-1640细胞悬浮液转入到15ml离心管；400×g, 3min，弃上清；

5.用10ml的RPMI-1640重悬细胞，按照4的步骤离心，弃上清；

6.用4ml的RPMI-1640重悬细胞

7.上下颠倒LSM，使其混匀;

8.取3ml LSM于15ml离心管;

9.小心将4ml脾脏细胞液慢慢加在LSM上；不要将细胞悬液和LSM液面层打破；

10.400×g（brake off）室温离心30min；

11.将最上层的透明血浆抽吸至淋巴细胞层以上2-3mm

12.抽吸淋巴细胞层和很少量LSM层，并将其转移到离心管中。在离心管的淋巴细胞层中加入等体积的RPMI-1640，室温以160-260离心10min；弃上清(底层未见明显细胞)。

13.重复洗涤一次，并用培养基悬浮至适当浓度，待用。