Ficoll与Percoll

作者:安特捷生物

1.价格:GE的Percoll比Ficoll贵两到三倍。



2.原理:isopycnicalcentrifugation. 即根据密度离心将不同密度的物质分离开来。(而非根据大小的rate zonalcentrifugation)



3.性质:

Ficoll: 所有性质都是特别为外周血单个核细胞分离而优化过的。


人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞,其体积、形状和比重与其他细胞不同,红细胞和多核白细胞比重较大,为1.092左右,而淋巴细胞和单个核细胞比重为1.075左右。利用密度在1.077±0.001g/L之间近于等渗的Ficoll-Hypaque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时,各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。血浆和血小板由于密度较低,故悬浮于分层液的上部;红细胞与粒细胞由于密度较大,故沉于分层液的底部;PBMC密度稍低于分层液,故位于分层液界面上,这样就可获得PBMC。



Percoll:

成分为硅化聚乙烯吡咯烷酮(PVP),为无毒,无刺激的新型密度梯度离心分离剂。聚乙烯吡咯酮包被的硅胶混悬液,它具有易成等渗、粘度低、无毒性、不引起细胞聚集等优点,已得到广泛引用。由于Percoll在培养基中颗粒大小不等,其在离心过程中自然形成密度梯度,从而将不同密度的细胞分离出来。将1份10×PBS与9份percoll储存液混合,制成等渗Percoll悬液,此悬液被认为是100 % Percoll悬液,其密度为1.1294g/ml,可通过用PBS(1x)或组织培养液稀释此100%Percoll而获得适宜密度进行细胞分离,因为稀释度与密度线性相关,常用的密度如下:

70% Percoll 1.090g/ml

60% Percoll 1.077g/ml

50% Percoll 1.067g/ml

40% Percoll 1.056g/ml

30% Percoll 1.043g/ml

20% Percoll 1.031g/ml

通过几个由高到低稀释度的叠加,形成与混合细胞的各组分细胞相应比重的梯度,达到可以将不同密度的细胞区分开来.

percoll还有一个优点,它不影响fluorescentactivated cell sorting (FACS),所以做细胞分选很方便。



4.用途:

Ficoll: 首先当然是从外周血中分离单核细胞。不过,同时也适用于脊髓干细胞的分离,骨髓干细胞的分离,也能用于颗粒细胞的分离。当然,还有一些衍生用途。

Percoll: 用途广泛得多,可以自制特定密度的continuous gradient,特别为自己优化分离细胞的实验条件,而且直接可以上FACS分选细胞。由于其密度涵盖范围广,更多的应用在亚细胞结构的分离,病毒分离等。



5.总结:

Ficoll只能分离出密度在1.077±0.001g/L之间的淋巴细胞

Percoll能将全血中的多种细胞分离出来,若只分离淋巴细胞,可以用普通淋巴细胞分离液


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货号

备注

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Stemcell

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