常见荧光染料小知识

作者:安特捷生物

流式技术的发展促进了越来越多的荧光染料的研发。传统的荧光染料如FITC、PE、APC、percp等在流式细胞术中应用很广。近年来,随着多色流式细胞分析技术特别是六色以上分析的发展,一些新型的荧光染料也逐渐得到应用。


      激发波长为488nm的荧光素主要有FITC、PE、PerCP、PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Texas Red、PE-Cy7、Alexa Flour 488

      激发波长为633nm的荧光素主要有APC、APC-Cy7、APC-H7

      激发波长为405nm的荧光素主要有Pacific Blue、BD Horizon V500、BD Horizon V450、Alexa Flour 405

      激发波长为375nm的荧光素主要有Hoechst 33342、DAPI


(1)FITC

      又称异硫氰酸荧光素,是一种常用的荧光染料,其标记的抗体适用于所有配有488nm氩离子激光器的流式细胞仪,FITC受到488nm激发光发射后发射光的最大波长为525nm,在流式细胞仪的FL1通道检测。值得注意的是,FITC的荧光强度受pH值的影响,pH值降低时其荧光强度也随之减弱。


(2)Alexa Flour 488

      是一种绿色荧光染料,其发射光与FITC几乎一致,可以用FITC通道检测。最大激发光波长为494nm,最大发射光波长为519nm,因此,Alexa Flour 488标记的抗体适用于所有配有488nm氩离子激光器的流式细胞仪。且该荧光不易猝灭,适用于pH范围大的情况。


(3)PE

     又称藻红蛋白,期标记的抗体适用于所有配有488nm氩离子激光器的流式细胞仪,PE受到488激光激发后发射光的最大波长为575nm,通常在流式细胞仪的FL2通道检测。


(4)PerCP

     又称多藻叶绿素蛋白,当被488nm激光激发后发射光的最大波长为677nm。由于PerCP与FITC、PE进行多色荧光染色时,期间荧光光谱重叠补偿很小,对髓细胞的非特异性结合也较少,所以在相关的分析中较多应用。但PerCP的量子产量较低,最好应用在较高表达抗原的检测上。


(5)APC

     又称别藻青蛋白,其标记的抗体适用于所有配有氦氖激光器或红色而激光激光器的流式细胞仪,其最大发射波长为660nm,在BD流式细胞仪通常用FL4通道检测


(6)PE-Cy5

      属于藻红蛋白偶联物,用Cy5标记的抗体与PE标记的抗体相互结合形成复合物后,能量可有效的从PE传到Cy5上。由于PE-Cy5和PE的重叠光谱范围非常小,因此实际工作中可以将PE-Cy5、PE及FITC搭配使用,但是不宜与APC搭配使用。


(7)PE-Cy5.5

      也属于藻红蛋白偶联物,由PE和Cy5.5偶联而成的荧光染料,其最大发射波长为694nm,可以与PE、FITC及APC搭配使用,相互间的荧光干扰小,补偿小,易于调节。

(8)PE-Cy7

     由PE和Cy7偶联而成的荧光染料,其最大发射波长为785nm,可与PE、FITC及APC搭配使用。但需要注意的是PE-Cy7荧光淬灭性很强,实验中需要严格避光。