如何正确阅读STEMCELL分选说明书

本文以#17852 EasySep™ Human CD4 Positive Selection Kit II 作为举例对象,主要解读使用紫色磁极18000的部分。


(1)


For processing 1 x 10^9 cells表示可处理的样本量是多少,并非得到的目的细胞量。如果一次处理 1 x 10^8 cells,则该KIT可以用10次。


(2)

Description的部分会告知该KIT适用于哪些类型的样本,如果您的样本不在说明书所述范围内,请联系STEMCELL技术支持(400-885-9050)或武汉安特捷生物(027-87660672)。


(3)

Sample Preparation的部分会给出不同样本的处理方法,比如冻存的PBMC就需要用到DNA酶防止细胞结块粘连。


(4)


操作步骤中标注A的地方需要按照细胞量计算。


比如A1,如果起始细胞是1×10^8cells, 则是用1ml buffer重悬,如果计数结果是5×10^7cells, 则是用0.5ml buffer重悬。所以分选前请一定计数。准确的计数是保证抗体、磁珠、细胞三者达到最优结合的关键。如果细胞起始量达不到最低的2.5×10^7cells,请按最低的体积加buffer,抗体和磁珠。如果超过,请分次分选或选用更大的磁极。


A2是指加入抗体(Selection Cocktail)的量,如果1×10^8cells, 则需使用50ul Selection Cocktail,如果是5×10^7cells,则需减半,用25ul。


A3磁珠部分(RapidSpheres)的计算方法同理。


(5)

说明书所有标注了mix的地方,请用移液器轻柔操作,避免产生气泡。


(6)


分选需要用到的是聚苯乙烯材质的流式管,请不要随便用离心管,玻璃管等。使用流式管的时候不用特别选用带盖的,我们更建议使用不带盖子的流式管。


(7)

补加足到2.5ml,此时磁极才能发挥出它的最大作用,面积密度达到最优比,请不要自行更改这个体积。


(8)

一次性倾倒,不犹豫,不反复,速度要快,留在管壁的即为目的细胞。


(9)

正选kit,流式检测用到的抗体需要注意一下克隆号,请使用推荐的克隆号,避免磁珠分选抗体将某些识别位点占用,造成流式染色不充分。