PeproTech细胞因子溶解保姆级教程

本文由最不会算溶解的小吴整理，算的慢，怕算错，所以是保姆级教程，有点啰嗦

PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，冻干粉在使用前需进行溶解，然后才能以液体形式加到培养体系或注射动物体内。所以溶解步骤非常关键，溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，那么，应该如何进行正确的溶解呢？

1）开盖前快速离心

问：何为快速？我应该如何设置离心参数？

答：有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键，按了此键后，离心机会自动快速上升到其最大速度(10000rpm或12000rpm)，上升到最高点后速度即刻下降，直至停止旋转，整个过程大约30s。这个Spin键足以很好地将细胞因子或蛋白收集到管底。如果实验室没有这样的高速离心机，只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。这种情况下，需3000-3500rpm离心5min，也能达到类似的效果。

2）看说明书（非常重要！非常重要！！非常重要！！！）

PeproTech的说明书是质量分析加说明二合一的。很多重要信息都在说明书上，比如用什么溶液初溶（重悬）？初溶浓度应该是在什么范围？长期储存怎么办？溶解后的有效期是怎样的等等。

3）初溶（重悬）

用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。一定要用COA推荐的溶液初溶（重悬）冻干粉。比如上图中的 315-32 Recombinant Murine R-Spondin-1, COA推荐的初溶（重悬）溶液是water，要求初溶（重悬）的浓度范围在0.1-1.0 mg/ml。那么假设您买的是50ug，您想溶解成1mg/ml的母液，那您则需要加50ul water 初溶（重悬），得到50ul   1mg/ml的Murine R-Spondin-1.

需要注意的是，初溶（重悬）一定不能振荡(vortex)，多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的，一般静置1min后用移液枪的枪头轻吹几下，即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。

4）配置储存液用于长期保存

如果一个实验周期长于一周，或配制的细胞因子或重组蛋白一次用不完，我们就需对细胞因子或重组蛋白进行长期保存。

方法是：将已初溶（重悬) 的细胞因子或蛋白用含载体蛋白，如0.1%BSA 或 5%的海藻糖溶液将初溶（重悬）液进一步稀释，然后分装冻存于-20℃至-80℃。

还是拿315-32 Recombinant Murine R-Spondin-1举例，我们刚刚在第3步中得到了50ul   1mg/ml的Murine R-Spondin-1，我现在需要配置成0.5mg/ml的储存液，那么根据公式C1V1=C2V2，初溶（重悬）后的管子中再加入50ul 5%的海藻糖溶液即可得到100ul 0.5mg/ml的Murine R-Spondin-1储存液。

计算步骤如图：

50ul一管分装，可分装为2支，每支浓度为0.5mg/ml（这里根据实际情况分装，您觉得之后配置工作液怎么用起来方便就怎么分装）

5）配置工作液

假设315-32 Recombinant Murine R-Spondin-1的工作浓度是500ng/ml，还是根据公式C1V1=C2V2，一支50ul 浓度为0.5mg/ml 的储存液可以配50ml的工作液，刚好一个离心管的量。

计算步骤如图：

注：因为50ul相较于50ml量很小，这里没有特意再用V2-V1

50ug 315-32 Murine R-Spondin-1操作总结：

1）初溶（重悬）得到50ul   1mg/ml 母液

2）复溶（稀释）得到100ul 0.5mg/ml 储存液

3）分装成2支，每支50ul

4）需要的时候拿一支出来用，配成工作浓度为500ng/ml 工作液

综上，请根据您的实际情况来计算用量，对于一些小规格的蛋白，可能一支也就只能配50ml工作液，如可以尽快用完，配置储存液用于长期保存并不是必须的步骤。但初溶（重悬）一定一定一定要严格按照COA操作。

啰啰嗦嗦一大堆，感谢您从头到尾的阅读~