STEMCELL  Sepmate管使用指南

确保样本,磷酸盐缓冲液(PBS + 2%FBS),密度梯度液和离心机均在室温(15-25℃)。


a.通过SepMate管的中心孔小心地吸取密度梯度介质至SepMate管。 请参阅表1以获取所需的用量。 密度梯度介质的顶部将位于插件的上方。

注意:移液后密度梯度介质中可能存在小气泡。 这些气泡不会影响性能。


b.用等体积的PBS + 2%FBS稀释样品,轻轻混匀。

例如,使用5毫升PBS + 2%FBS 稀释5ml样品。


c.保持SepMate管垂直,从管壁侧面加入稀释的样本,在插件上方,样本会与密度梯度液混合。

注:样品可以倒在管的一侧。 注意不要将稀释样品直接倒入中心孔。


d. 1200×g室温下离心10min,可保持刹车开启。

注:对于超过24小时的样品,推荐离心20分钟。


e.将包含富集的MNCs的上层液体倒入新管中。请勿将SepMate管保持在倒置位置

超过2秒。

注意:离心后SepMate管表面可能会有一些红细胞(RBC)存在。这些红细胞不会影响

性能。

注:为了减少富集的MNC中的血小板污染,在倾倒之前将MNC层上方的一些上清液移走。


f.PBS + 2%FBS洗涤富集的MNC 重复清洗至少2

注意:建议在室温下以300 x g离心8分钟,开启离心机刹车。

注意:要从富集的MNC中除去血小板,请在室温下以120 x g进行10分钟的洗涤,关闭离心机刹车。

注意:如果SepMate管上方的密度梯度介质在离心机离心后出现红色(即一些红细胞没有沉淀),则可以在开启离心机刹车的情况下将SepMate离心管以1200 x g离心10分钟。 处理超过24小时的样品时,此步骤可能是必要的.


表1