R&D Systems试剂 Q&A 常见问题解答

问:R&D Systems有分装试剂吗?

答:没有分装试剂。R&D Systems公司不会分装,也没有授权任何公司进行分装。目前市场上所谓的“RD分装试剂”是没有品质保证的3无产品,R&D Systems公司不承担任何“RD分装试剂”的售后服务。在此,建议广大客户和经销商从R&D Systems中文网站上公布的正规经销商处订购。


抗体

问:目录中抗体的名称有AB, AF, BAF, MAB之分,它们有何不同?

答:带有AB的抗体是用G蛋白纯化的,带有IgG成分;带有AF的抗体经G蛋白纯化后又经抗原亲和层析纯化。所以,AF抗体为抗原特异性的IgG,而AB抗体含有与目标分析物非特异性的IgG。BAF是生物素化的AF抗体;MAB是单克隆抗体。

问:IgG的分子量是多少?

答:IgG的分子量是150kDa。它由两条50kDa的重链和两条25kDa的轻链组成。

问:某一单克隆抗体所识别的抗原表位是什么?

答:R&D Systems不做抗原表位的定位。抗体是针对整个免疫原(列在数据表中)的。

问:某一多克隆抗体所识别的抗原表位是什么?

答:多克隆抗体有多个抗原表位识别位点。抗体是针对整个免疫原(列在数据表中)的。

问:什么是Thehalose?它为什么在这个抗体上?

答:Thehalose是一种非还原糖(分子量为342.1), 它在梅拉德式(Maillard)反应中与氨基酸和蛋白都不作用。它存在于许多植物和动物中。有报道称Thehalose是稳定蛋白抗御冰冻的最有效抗冻剂,它使得蛋白抵御水分的能力增加从而使产品在重新溶解时不容易产生沉淀物。

问:采用Trehalose稳定蛋白的原因是什么?

答:Trehalose主要用于在冰冻和脱水过程中保护蛋白。它是非还原糖,在干粉化时呈非结晶状。


细胞凋亡

问:为什么有两套不同的TUNEL试剂盒?

答:因为有两种不同的TUNEL方法可检测细胞凋亡。第一种方法采用TdT酶(末端脱氧核苷酸转移酶)将生物素化的核苷酸加到组织中的DNA片段的3'-羟基端。加入正离子可使这种标记更有效,经生物素化的核苷酸可用streptavidin-HRP共轭物和底物来检测。

第二种方法仍采用TdT酶(末端脱氧核苷酸转移酶)将核苷酸加到样本中的DNA片段的3'-羟基端,但采用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记而非生物素,再用生物素化的抗5-溴脱氧尿苷(BrdU)抗体来检测。采用这种方法的细胞凋亡检测试剂盒包括:TA100 TACS-XL基本原位细胞凋亡试剂盒;TA200 TACS-XL DAB原位细胞凋亡试剂盒;TA300 TACS-XL蓝色标记原位细胞凋亡试剂盒;TA400 TACS-XL补充细胞凋亡试剂盒;

问:Caspase活性测试是如何使用的?

答:Caspase活性测试为在细胞裂解液中检测蛋白酶活性提供了简捷方便的手段。当对专一Caspase的多肽底物被裂解时,释放出的指示分子可用普通读光仪或荧光读板仪来做定量测定。将从细胞凋亡样本得到的信号同未经诱导的对照样本进行比较,可以确定Caspase活性增加的倍数,而Caspase酶活性是同检测到的信号直接成正比。

问:Caspase活性测试是否可用于定量检测?

答:R&D Systems的Caspase活性测定试剂盒可作为半定量测试。检测结果最好用于测量在细胞凋亡细胞中与未经诱导细胞中的Caspase活性倍数的增加。实验时,最好采用本底对照(无细胞裂解液或无底物的反应)。如果本底对照也有一定的读数,这一读数应当在记算倍数增加之前从试验数据中差减。

问:Caspase活性检测同Caspase ELISA试剂盒有何不同?

答:Caspase活性检测用于测定不同Caspase的蛋白酶的活性,表达为比未诱导样本的倍数增加。Caspase ELISA试剂盒用于测定不同Caspase在样本中的含量,以pg /mL定量表达。

问:caspase X 活性测试是对caspase X专一的吗?

答:大多数caspase会裂解所有的底物,它们根据Michaelis-Menton动力学趋于选择某一底物而非另一底物,但没有任何底物是对某一Caspase专一的。比如,Caspase 3和Caspase 7都可裂解DEVD底物;Caspase 9、4、5 都可裂解LEHD。R&D Systems为每一Caspase选择了它所适宜的底物。 如果反应进行的太久,一些Caspase会激活另一些Caspase。

问:Caspase活性检测试剂盒中的细胞裂解液是否同其它试剂盒中的一样?

答:所有的Caspase活性检测试剂盒中的细胞裂解液都是一样的。所以,可用它裂解细胞,和用于多种Caspase活性的测试。

问:R&D Systems的Caspase抑制剂是否可逆?

答:所有R&D Systems的Caspase抑制剂在N端有苯甲氧碳基(Z-)和FMK功能组,它们可穿孔细胞,是不可逆转的。

问:R&D Systems是否为Caspase活性检测提供阳性对照?

答:R&D Systems提供多种重组Caspase酶,它们是理想的阳性对照。如果试验者自己想建立一阳性对照,有许多可以产生细胞凋亡的阳性对照的方法都已发表。如果将细胞同2 mM星形孢菌素(Staurosporin)温育2小时,可诱导绝大多数细胞类型进入细胞凋亡。R&D Systems有文献资料列举了对Caspase如何产生阳性对照,可向我们的技术服务索取。


酶联吸附免疫法

问:人的Quantikine ELISA试剂盒是否有相关的对照?

答:R&D Systems为人的Quantikine ELISA试剂盒提供三重对照组。请同我们联系以便确定产品的目录号。

问:我想使用你们目录中的重组蛋白作为我的ELISA的对照,但我发现质量上有差异。这是为什么?

答:首先要考虑的是重组蛋白的质量会高出试剂盒的可测试范围数倍,必须将重组蛋白稀释多次才能得到试剂盒的测试范围。一般来说是从mg/毫升稀释到pg/毫升,在这中间光是移液管的误差就达到了可测量的水平。

其次要考虑的是R&D Systems的免疫测试方法测量的蛋白水平是用一种抗体捕获的、用第二种抗体测定的,这种测定是在试剂盒研发时与标准蛋白校正过的。这些经过测定的早期标准蛋白成为基本校正物,后来的标准都同它校正。这样不同生产批号的免疫测定试剂盒将是一致的。这些基本校正物蛋白质量的测量方法也许与你的试剂管中蛋白质量的测定方法有所不同。

问:什么是竞争性ELISA?

答:竞争ELISA基于竞争结合技术,即样本中的待测分子与固定量的标记的同样分子(我们一般用碱性磷酸酶作为标记)同时与固定在孔板上的抗体的同一结合位点进行竞争,参照标准曲线,试验数据值是定量的。

问:什么是夹心ELISA?

答:夹层ELISA采用对样本中分析物的特异的抗体作为固定化的捕获抗体,然后用第二个带标记的抗体作检测,检测抗体对分析物也是专一的。当参照标准曲线时,试验数据值是定量的。

问:什么是直接ELISA?

答:直接ELISA是将被测的分析物直接包膜在微孔板表面,然后用测试抗体来证实被测分析物的存在。当与重组蛋白(标准曲线)进行参照时,试验数据值是半定量的。

问:R&D Systems Parameter品牌的ELISA试剂盒可以做多少个样本?

答:R&D Systems Parameter品牌的ELISA试剂盒可以做6点的标准曲线、对照和41个样本(每个样本做双份)。

问:R&D Systems的Quantikine品牌人的ELISA试剂盒可以做多少个样本?

答:大多数R&D Systems 的Quantikine品牌人的ELISA试剂盒可以做标准曲线、对照和40个样本(每个样本做双份)。

问:R&D Systems的Quantikine品牌的小鼠、大鼠和猪的ELISA试剂盒可以做多少个样本?

答:Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA试剂盒中的每一微孔板可以做标准曲线、对照和39个样本(每个样本做双份)。Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA试剂盒中,有些有两个微孔板,有些只有一个微孔板。

问:R&D Systems建议用什么样的ELISA微孔板来做DuoSets和抗体配对实验?

答:在R&D Systems本部,我们用Costar的微孔板(目录#2592)。Costar的电话是(800)492-1110。

问:R&D Systems用什么纯度的BSA做ELISA?

答:为了ELISA,我们采用Serological Proteins的BSA(目录#82-045)。Serological Proteins的电话是(815)937-8270。

问:Quantikine ELISA试剂盒里都包括什么?

答:R&D Systems的Quantikine ELISA试剂盒是一个完整的试剂盒。它包含了一个已包板的微孔板、酶标抗体、标准蛋白、稀释剂、底物、终止剂、洗液和微孔板密封膜。所有试剂盒对实验说明书中所列样本都经充分验证,确保高质量。

问:什么是DuoSet?

答:DuoSet ELISA开发系统提供了足够的捕获抗体、测试抗体、标准蛋白和Streptavidin-HRP,可以做大约十五个96孔微孔板的实验。我们还提供了样本试验流程和与这一系统配套的试剂。DuoSet ELISA开发系统主要是为高通量筛选细胞培养的上清液所设计,但熟悉ELISA研发的实验人员已成功将其推广到血清和血浆样本的使用。

问:什么是R&D Systems的抗体配对?

答:R&D Systems的抗体配对是一个自己动手的产品。R&D Systems建议此产品的使用者在免疫测试的开发方面应很有造诣。使用者必须以经验为依据来决定捕获抗体和测试抗体的最佳浓度。R&D Systems的重组细胞因子并未经ELISA校正,所以在使用前必须经ELISA做质量校正。更多有关ELISA开发的信息可参照我们的《ELISA开发指导》 (网站: http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa_development.aspx) 。

问:Quantikine和QuantiGlo ELISA试剂盒有何不同?

答:R&D Systems的Quantikine牌子的ELISA试剂盒是一种比色法检测,需要一台标准读光仪配备有合适的滤光片可用于读数和光波长校正。QuantiGlo ELISA试剂盒采用了一种荧光底物,计数为光流明或相对光单位(RLU)。因此,QuantiGlo ELISA试剂盒需要有荧光读光仪。这种荧光读光仪需设置在:1.0分钟的滞待时间;1.0秒/孔的读数时间;累计状态;自动获取开启。R&D Systems使用Dynex Technologies的荧光读光仪。

问:普通Quantikine ELISA试剂盒同高灵敏Quantikine ELISA试剂盒有何不同?

答:高灵敏Quantikine ELISA试剂盒一般用于非常低量的细胞因子的检测,比如正常人(健康状态时)的血清和血浆。当普通Quantikine试剂盒一般检测不到(或几乎检测不到)正常人血清和血浆中的细胞因子,可选择高灵敏Quantikine。我们建议实验者先查阅文献资料来确定试验的测试范围以选择所需的试剂盒的种类。

问:R&D Systems的Quantikine试剂盒是否可用于组织匀浆(或其它未经检验的)样本?

答:很遗憾,R&D Systems尚未采用组织匀浆作为样本对Quantikine系列的试剂盒做效果验证。如果要决定试剂盒是否可用于未经检定的样本,实验者最好先做一个“掺入和回收预试验”。简单来说,实验者将样本分为两份:一份中掺入一定量的试剂标准,然后做一稀释系列(一般稀释到1:16),再将掺入过的一份同未掺入的一份相比。采用以下的公式来计算回收率(%):测试值(pg /毫升)/ 期待值(pg /毫升)x 100% = % 回收率。一般来说,回收率在80-120%可认为是可接受的。但是,可接受范围应由每一实验室自行决定。这种方法可用于检定未被R&D Systems检定的任何样本。我们还有更加详细的“掺入和回收”的实验步骤,可向我们的技术服务部索取。我们也可进一步查阅文献看一看是否有其他试验人员用我们的产品做过不同的样本,或不同的属种。

问:加入稀释剂是否会将样本进一步稀释?

答:因为稀释剂是加入到所有的孔中,标准和被测样本都被同样稀释,所以样本的浓度可从标准曲线读出,而不需作稀释调整。

问:我是否可将标准曲线的两端延伸?

答:在任何情况下,我们都不支持超出确定范围的实验结果。在我们确定的测试范围,我们保证实验结果的可重复性。

问:为什么不将测试范围延伸到所述的灵敏度?

答:灵敏度是统计中大于零的可测到的最低值。它是通过本底信号和试验的可变性计算出来的。灵敏度是将20个零复制物的中值加两个标准差从标准曲线换算成分析物的浓度。而最低标准是我们可以放心的、仍可与标准曲线成直线相关的最低点,因而是可定量的。

问:Quantikine试剂盒中的试剂是否可互换?

答:如果试剂盒(RD1-, RD5-, RD6-)中的稀释剂有相同的组件号和批量号,它们可以互换。R&D Systems做“整个试剂盒的质量控制”,就是说,我们不支持不同批号之间的替代。在任何情况下,微孔板和共轭物都不可互换。

问:Quantikine试剂盒中的洗液是否可互换?

答:如果组件号相同,洗液在相同类型的试剂盒之间(普通试剂盒之间,或高灵敏度试剂盒之间)是可以互换的。但是,普通Quantikine试剂盒中的洗液不能用于高灵敏度的试剂盒,在普通Quantikine试剂盒中的洗液含有磷酸,会干扰高灵敏度Quantikine试剂盒中由NADPH驱动的信号扩增。

问:在某些实验中为什么必须使用聚丙烯(polypropylene)的试管做标准稀释?

答:有些细胞分子会粘到玻璃或聚苯乙烯(polystyrene),但不粘聚丙烯。

问:在Quantkine试剂盒中没有足够的RD5校正物来稀释我的细胞上清液,我该怎么办?

答:你可用细胞培养液来做起始的稀释,直接移液到微孔板的最终的1:10稀释可使用校正物来稀释。

问:我的Quantikine试剂盒中的RD1测试稀释剂看上去有沉淀物,可以用吗?

答:有些RD1测试稀释剂的确有不同程度的沉淀物。在这种情况下,我们在实验步骤手册中已做纪录。

问:标准曲线为什么要采用4-pl拟合?

答:R&D Systems在研发和质控我们绝大多数的Quantikine ELISA试剂盒时,采用4-相参数的曲线拟合(又名为4-pl或sigmoidal曲线拟合)。一般来说,它比log-log和直线有更好的曲线拟合。如果数据分析不可用4-pl的话,log-log是下一个最好的选择。

问:试验步骤中说要用500 rpm,我的摇床达不到。这个速度是正确的吗?

答:500 rpm使用的是0.12英寸的震荡轨道。如果你的震荡器用更大的震荡轨道,500 rpm的确是过快了。在这种情况下,你应根据R&D Systems的建议重新调整震荡速度。你可拿一个多余的96孔微孔板,加入洗液,洗液的量与实验时孔中的溶液量一致;封板后,调整震荡器的速度,直到液体在孔的上部剧烈旋转但不溅到封膜上或产生泡沫为止。

问:我有太大变异系数(CV)的问题,是怎么回事?

答:最大但不是唯一的两个原因,可能是移液误差和清洗方式。你可参照我们的《如何成功地操作ELISA指导》,网址:http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa.aspx

问:Quantikine ELISA试剂为什么需要做稀释?

答:主要有两个原因:一,在绝大多数的样本中细胞因子的含量非常高,如不经稀释,读数将高于标准曲线;二,也是最普遍的原因我们建议做稀释,是将样本中的干扰或基质效应稀释掉。

问:我是否可以在任何过夜步骤停止Quantikine试验、延长温育时间、或提高温育的温度?

答:R&D System不建议对任何Quantikine ELISA延长温育时间。而且,当实验步骤改变了,我们无法保证Quantikine ELISA的实验结果。R&D System做“整个试剂盒的质量控制”,就是说我们无法支持改变过的实验步骤,因为它们未经质量控制。延长温育时间、或提高温育温度以缩短温育时间会提高实验的本底(又名空白或零标准)。这样一来,样本和标准中的低量细胞因子会测不到,因为增高了的本底信号将从所有孔中的数值中差减。

问:我用了DuoSet ELISA开发系统,但几乎就没有颜色产生。那些步骤可能出了问题?

答:很多方面都会影响到颜色的产生。比如:

1)    BSA的干扰。选择不含脂肪酸的ELISA级别的BSA很重要,可以降低球蛋白对实验的干扰。R&D Systems建议使用Serological Proteins的BSA(目录#82-045)。

2)    非室温下的试剂在使用时会抑制信号;如果室温过低,信号也会被抑制。

3)    如果使用了未表明为“高结合性ELISA”的微孔板,捕获抗体同微孔板的结合就不牢固,从而导致测试的颜色产生过低。

4)    任何试剂,如果配制出错、储藏不当、或已过期,都将出现这一问题。

5)    读板时使用的波长同底物的波长不一致。

问:我是否可以使用你们的抗体配对ELISA中的抗体,但用另一家公司的蛋白为标准?

答:若使用一家公司的抗体而用另一家公司的标准的带来问题是它们会有不同的免疫活性(或不同的抗体与重组蛋白的结合力)。这种现象的出现是因为作为标准的重组蛋白同作为抗体免疫原的重组蛋白在蛋白序列或折叠中会有所不同,如果蛋白序列或折叠的不同发生在抗体结合部位,就会引起抗体对重组蛋白标准的不识别或识别很差。

酶联免疫斑点

问:什么是ELISpot?

答:R&D Systems的ELISpot测试采用了ELISA技术。先将对某一细胞因子专一的单克隆抗体固定于微孔板的PVDF膜上,再将经适当刺激诱导的细胞移液到微孔中,然后将整个微孔板放置在保湿的370CCO2培养箱中温育特定的时间;在温育的这段时间里,固定化的抗体与它们周围分泌细胞析出的细胞分子结合;洗掉细胞和未结合的分子,加入对这一细胞因子有特异性的生物素化的多克隆抗体;清除未结合生物素化的抗体,加入经streptavidin共轭的碱性磷酸酶;将未结合的酶从反应中洗除后,再加入底物溶液(BCIP/NBT);一个蓝黑色的沉淀(斑点)在细胞因子产生的位置形成,每一斑点代表了分泌特定细胞因子的细胞。这些斑点可用自动读板系统(不同于普通读光仪)读出;或者,这些斑点也可用立体显微镜手控读出。

问:ELISpot与ELISA有何不同?

答:ELISA实验测量的是样本中某一细胞因子的总量(一般表示为pg或ng /mL);ELISpot实验并不测定样本中某一细胞因子的量,而是测定有多少细胞在分泌某一细胞因子。

问:ELISpot与组件有何不同?

答:R&D Systems的ELISpot试剂盒含有:对某一细胞因子有特异性的单克隆抗体(这一抗体已预先固定在微孔板的PVDF膜上)、生物素化的检测抗体,Streptavidin共轭的碱性磷酸酶、BCIP/NBT产色物、和重组细胞因子阳性对照。试剂盒备有试验所需所有的用品,试验者不需再进行优化。

R&D Systems的ELISpot开发试剂分为两个必需组分,必须分别购买对细胞因子具有特异性的开发组件和ELISpot蓝色组件。对细胞因子专一的开发组件包括对细胞因子特异的捕获抗体和检测抗体;ELISpot蓝色组件(目录#SE002)对所有R&D Systems的对细胞因子特异的开发组件都适用,它包含Streptavidin-碱性磷酸酶和BCIP/NBT产色物。

问:我是否可只使用ELISpot试剂盒中的部分微孔板?

答:因为带有PVDF膜的微孔板很灵敏,我们不能将微孔板做成条状的形式。如温育多次,我们将不能保证使用微孔板所得的实验结果;因为微孔板不再无菌,所以未使用的微孔可能有污染。我们并不担心第一次使用时污染会有,因为大多数的细胞培养液都含抗菌素,而温育时间又相对较短。我们选择带有的PVDF微孔板是因为它能比标准ELISA级别的聚丙乙烯(polystyrene)微孔板提供更好的实验结果。

问:我需要用多少细胞?

答:这个问题比较难回答,根据实验要求而异。使用多少细胞有许多变量:比如细胞的大小、细胞的类型、分泌细胞因子的细胞的多少、诱导细胞的方法等。刚开始时,需要做一些细胞的稀释(如,将每孔10,000,000个细胞稀释到100,000甚至到10,000个细胞)来决定可形成明显斑点的最佳细胞数。例如,如果微孔中的细胞已达到单层融合状而大部分细胞分泌待测的细胞因子,形成的斑点就很难分开,这样就很难定量检测到分泌所测的细胞因子的细胞数;在这种情况下,应做一系列稀释(titration),降低细胞数。如果在同样的单层融合状细胞中只有少数细胞分泌待测的细胞因子,形成的斑点就会很明显,就很容易被定量测定;在第这种情况下,细胞数目就是合适的。所以,必须针对不同细胞类型和诱导方法来确定每孔中应加入细胞的最佳数目。

问:在一个微孔板上可做多少个样本?

答:这是基于96孔微孔板的测试。除去阳性对照、阴性对照、本底(空白)和检测抗体对照外,还剩下88孔,可做44个样本(每个样本做双份)。

一般常见问题

问:蛋白和抗体的期限?

答:R&D Systems有一政策就是不给我们的蛋白和抗体产品提供生产日期或产品期限,从而限制产品的使用期限。在适当的储存条件下,蛋白和抗体趋于稳定多年。这些储存条件包括以干粉形式储存蛋白、或在蛋白浓度高于0.1毫克/毫升时冷冻(-20°C或-80°C)储存蛋白并减少冷冻/解冻的次数。请参照每一产品插页中的指示。我们公司常规的质量控制保证每一产品在售出时都具有生物活性。在实验者收到产品后,我们无法控制产品的储存状况。我们愿以产品保证书来替代产品期限。在正常实验条件下,我们保证R&D Systems的所有的产品将达到或超过我们公布的标准。

问:X产品是否可用于X用途但未列入资料单?

答:如果某一特定用途未列入我们的资料单,R&D Systems内部没有更多的数据。我们的技术服务可以查阅我们的文献库,看一看是否有其他实验人员发表过这一产品的这类用途、样本类型、和/或种属。

问:列在你们网站上的产品带有/CF,是什么意思?

答:CF代表无携带物。一般来说,每1 mg的细胞因子都加有50 mg的BSA(携带蛋白)以稳定细胞因子。无携带物的形式不含任何BSA。通常来说,带有BSA的细胞因子比不带携带物的细胞因子可在更低的浓度保存、有更长的货架寿命。如果细胞因子是用于加入细胞/组织培养或作为ELISA的标准,可采用带有BSA的细胞分子。当细胞因子是用于原位应用、标记细胞因子、或BSA会产生干扰的实验时,应采用无携带物的细胞因子。

问:rhEPO是以单位列出的,如何换算成质量?

答:R&D Systems的重组人EPO(超纯)目录#286-EP-250,和我们的重组人EPO(组织培养级)目录#287-TC-500,都有同样的单位对质量的转换。一单位的rhEPO大约是10 ng。

问:R&D Systems是用什么级别的BSA来重新配制细胞因子溶液的?

答:R&D Systems采用Serological Proteins的馏分V BSA(目录#81-068)来重新配制蛋白溶液。Serological Proteins的电话是(815)937-8270。

问:为什么一些R&D Systems的重组蛋白有Fc融合?

答:Fc可以稳定分子。R&D Systems利用Fc部分有趋于成双聚体的倾向,创建有生物活性的双聚体分子。以受体/ Fc嵌合体为例,与其可溶性受体相比,这种融合体辅助我们创建了可与它的配位体产生更高亲和力性的受体。R&D Systems提供同样的Fc部分作为对照。目录是:110-HG,人的重组IgG/Fc。

问:R&D Systems的一些产品为什么需用酸性溶剂来重新配制?

答:采用酸性溶剂来重新配制某些细胞因子是非常关键的。因为有些细胞因子的等电子点很高,它们有极高的疏水性。如不使用这种酸性重配剂, 这些细胞因子就很难全部溶于溶液中。因为同样原因,我们还建议用同样的酸性重配剂来储存这些细胞因子的分装样。这些重配剂的pH值通常在4.5-5。 这些已处于溶液状态的蛋白分装样可用细胞培养液(或其它合适的缓冲液)进一步稀释到工作浓度。这样一来,溶剂中少量的酸可被缓冲掉,可安全用于活细胞。

问:为什么要将某一细胞因子用PBS/BSA重新配制如果它是从同样的溶液中干粉化的?

答:在重配剂中额外的BSA可以帮助细胞因子的回收、同时也增加稳定性。R&D Systems用于干粉化溶液中的BSA的体积是极微的,所以用的PBS/BSA重配剂并不会得到2X盐浓度。如果未按照资料单所述方式来重新配制,R&D Systems将不能保证产品的结果,因为我们就是这样来质量控制我们产品的。

问:如何将千道尔顿(kDa)转换成克/摩尔?

答:R&D Systems将我们蛋白的分子量以千道尔顿(kDa)列在资料单上。大概换算率是:1道尔顿=1克/摩尔(即一个8千道尔顿的蛋白相当于8,000克/摩尔)。

问:如何将你们的产品换算成国际单位?

答:对细胞因子而言,业内尚无统一标准的单位。为避免混乱,R&D Systems有意识地将我们的蛋白以质量为单位。普遍接受的定义是:一单位等同于某一实验的ED50值。很显然,不同条件下的ED50值会有所不同。如果遵循某一实验结果的单位,或以单位来比较不同供应商的产品,必须首先确定产品来源的这一单位是如何定义的。当第一次用一批新产品或新来源时,R&D Systems强烈建议实验者先用样本做一系列稀释,建议以我们ED50范围的中点作为稀释的中点,上下各增加和减少5, 10, 20,甚至50倍。如果试验人员或产品的来源用他们的“单位”同WHO的标准单位相比,我们在目录中和网站上都列有“WHO转换表”(http://www.rndsystems.com/asp/g_sitebuilder.asp?bodyId=235),实验者可查询以便决定实验的设置。

问:为了有生物活性,这个蛋白要求我用一个交联结合的抗体-- MAB050。这是一个什么抗体?我一定要这么做吗?

答:这个抗体是针对6x组蛋白叠序的,我们建议使用的带有交联结合体的蛋白含有6x组蛋白标签。R&D Systems用这个抗体来交联结合组蛋白标签,使得带有组蛋白标签的蛋白具有更高的生物活性。R&D Systems质控检验这些经过抗体交联结合的蛋白,保证它们的ED50与未经交联结合的蛋白的ED50相符。所以,如不采用交联结合抗体,不同批号之间的蛋白将有非常显著的不同的ED50


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