细胞冻存protocol

贴壁细胞冻存通用步骤

1)配置细胞冻存液(通用配方:70%基础培养基+20%血清+10%DMSO);

2)选用生长状态好(90-95%),生长数量大于5×105 的细胞进行冻存;

3)细胞冻存24 小时前,须用新鲜细胞培养液培养24 小时;

4)弃去细胞培养液,用含双抗的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养瓶2 次;

5)将细胞消化液加入细胞培养瓶,轻轻摇动,使细胞消化液刚好完全覆盖细胞培养瓶瓶底;

6)弃去细胞培养液,用含双抗的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养瓶2 次;

7)将细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC细胞培养箱1-2 分钟后,在显微镜下观察细胞的消化状态。如观察到贴壁细胞逐渐趋于圆形、少部分悬浮,则用手指轻轻拍打细胞培养瓶底部,直至大部分贴壁细胞悬浮,然后加入1ml 完全培养基(指含有血清的培养基),终止细胞消化;

8)将消化好的细胞悬液收集至15ml 离心管中;

9)细胞离心管在1000rpm 下离心5 分钟,小心弃上清液;

10)用细胞冻存液重悬后转移至细胞冻存管中,拧紧管盖。标注好细胞名称和冻存日期;

11)按室温→4℃(30 分钟)→ 冰箱冷冻室-20℃(30 分钟)→ 超低温冰箱(-80℃过夜)→ 液氮罐顺序降温保存细胞。


悬浮细胞冻存通用步骤

1)配置细胞冻存液(通用配方:70%基础培养基+20%血清+10%DMSO);

2)选用生长状态好(90-95%),生长数量大于5×105 的细胞进行冻存;

3)细胞冻存24 小时前,须用新鲜细胞培养液培养24 小时;

4)将悬浮细胞转入离心管,1000rpm 下离心5 分钟,小心弃上清液;

5)加入适量PBS重悬细胞,1000rpm 下离心5 分钟,小心弃上清液;

6)用细胞冻存液重悬后转移至细胞冻存管中,拧紧管盖。标注好细胞名称和冻存日期;

7)按室温→4℃(30 分钟)→ 冰箱冷冻室-20℃(30 分钟)→ 超低温冰箱(-80℃过夜)→ 液氮罐顺序降温保存细胞。


通用配方说明:客户用什么培养基养的细胞,就用什么培养基配冻存液,比如要配10ml的1640冻存液,就可以取7ml1640+2mlFBS+1mlDMSO配成。


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